水淹脅迫研究NMT標(biāo)準(zhǔn)化方案
水淹脅迫研究NMT標(biāo)準(zhǔn)化方案
一、視頻資源
二、參考文獻(xiàn)
C2018-056，張建華、劉鷹高，香港中文大學(xué)、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，Plant journal，水稻，胚芽鞘，Ca2+
Natural variation in the promoter of rice calcineurin B‐like protein10 (Os CBL 10) affects flooding tolerance during seed germination among rice subspecies
C2018-001，許衛(wèi)鋒/張建華，福建農(nóng)林大學(xué)/香港中文大學(xué)，Plant Physiology，根，H+/Ca2+/H2O2
C2015-023，許衛(wèi)鋒/張建華，中科院南京土壤研究所/香港中文大學(xué)，J EXP BOT，根，H+
Involvement of 14-3-3 protein GRF9 in root growth and response under PEG-induced water stress
三、常測(cè)哪些指標(biāo)
Ca2+、H+、H2O2、K+
四、檢測(cè)這些離子流、分子流，有什么生物學(xué)意義
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2）科研案例
利用非損傷微測(cè)技術(shù)檢測(cè)了兩個(gè)水稻栽培品種Low88和Up221胚芽鞘以及距離胚芽鞘尖端不同距離部位的Ca2+流速，結(jié)果顯示兩個(gè)品種直接的Ca2+流速存在差異。結(jié)合基因表達(dá)量測(cè)定、GUS等實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明，水稻萌發(fā)過(guò)程中對(duì)淹水脅迫的適應(yīng)與兩種不同的OsCBL 10 啟動(dòng)子有關(guān)，這反過(guò)來(lái)又影響了OsCBL 10 在不同品種中的表達(dá)，并對(duì)OsCIPK 15 的蛋白質(zhì)積累及其下游級(jí)聯(lián)產(chǎn)生負(fù)面影響。
Ye NH, Wang FZ, Shi L, et al. Natural variation in the promoter of rice calcineurin B-like protein10 (OsCBL10) affects flooding tolerance during seed germination among rice subspecies. Plant J. 2018;94(4):612-625.
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1）H+生理功能概述
2）科研案例
實(shí)驗(yàn)材料分為野生型擬南芥（WT）、GRF9缺陷突變組（grf9）以及GRF9超表達(dá)組（OE），利用NMT檢測(cè)了根部H+的流動(dòng)。流速結(jié)果顯示，GRF9促進(jìn)了水脅迫條件下，擬南芥根部伸長(zhǎng)區(qū)、根毛區(qū)H+的外排。結(jié)合嫁接實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和對(duì)長(zhǎng)勢(shì)的觀察，表明在水脅迫條件下，GRF9通過(guò)激活質(zhì)膜H+-ATPase、促進(jìn)根部生長(zhǎng)區(qū)域分泌H+，并且加強(qiáng)地上部分有機(jī)物向根部分配，從而調(diào)節(jié)植物應(yīng)對(duì)水脅迫。這一結(jié)論也合理解釋了水脅迫條件下相比于地上部分，根部生長(zhǎng)更為旺盛的原因。
He Y, Wu J, Lv B, et al. Involvement of 14-3-3 protein GRF9 in root growth and response under polyethylene glycol-induced water stress. J Exp Bot. 2015;66(8):2271-2281.
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1）K+生理功能概述
2）科研案例
利用非損傷微測(cè)技術(shù)，檢測(cè)兩種不同基因型的大麥NN和TX根部次生代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的影響。水淹敏感的大麥品種NN被三種一元羧酸和三種石碳酸處理都能引起穩(wěn)定的K+外流，并伴隨著H+內(nèi)流，但是在耐澇品種TX的根細(xì)胞中沒(méi)有K+的顯著改變?；谒幚韺W(xué)實(shí)驗(yàn)和膜電勢(shì)的結(jié)果，提出了一個(gè)解釋次級(jí)代謝物對(duì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)活性影響的模型，為以后的研究和育種提供新的方法。
Pang J, Cuin T, Shabala L, Zhou M, Mendham N, Shabala S. Effect of secondary metabolites associated with anaerobic soil conditions on ion fluxes and electrophysiology in barley roots. Plant Physiol. 2007;145(1):266-276.
五、可以檢測(cè)哪些樣品
1、動(dòng)物樣品
1）細(xì)胞
神經(jīng)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等
2）組織器官
腫瘤、皮膚、胃粘膜、胰島、腦（海馬體等）、胚胎（大鼠、魚）、斑馬魚皮膚/鰓、耳蝸、心臟（香螺）、卵（魚、雞蛋、爪蟾）、骨骼、角膜、脊椎（豚鼠）、肌肉組織（肌纖維、心?。?/p>
3）其它動(dòng)物樣品
珊瑚、螨蟲、昆蟲（果蠅幼蟲的腸、蟑螂血腦屏障、按蚊、長(zhǎng)紅錐蝽）、蝌蚪、水蛭、藍(lán)蟹（微感毛）、變形蟲、水絲蚓
2、植物樣品
1）營(yíng)養(yǎng)器官
莖：邊材、心材、微管形成層、木質(zhì)部
葉：表皮細(xì)胞、葉肉細(xì)胞、鹽腺細(xì)胞、保衛(wèi)細(xì)胞
2）生殖器官
花：花瓣、花瓣表皮細(xì)胞、花粉
種子：整體、胚
果實(shí)：果殼、果皮、果肉（蘋果、柑橘）、籽粒、棉花纖維、棉桃
3）細(xì)胞：植物懸浮細(xì)胞、液泡
4）愈傷組織
3、微生物樣品
酵母細(xì)胞、菌絲、菌落、微藻、細(xì)菌（大腸桿菌）
4、其它生物樣品
周叢生物
5、非生物樣品
金屬、混凝土、泥沙、納米材料、生物醫(yī)藥材料
六、樣品需要做哪些前處理
國(guó)際領(lǐng)先的非損傷微測(cè)技術(shù)最大的特點(diǎn)就是活體、無(wú)損檢測(cè)，因此動(dòng)植物材料在檢測(cè)前，不需要任何的液氮速凍、染色、研磨處理等。
1、動(dòng)物單細(xì)胞
因NMT是活體檢測(cè)，故從培養(yǎng)箱中拿出來(lái)后，置于培養(yǎng)皿中，直接檢測(cè)即可。
2、動(dòng)物組織
因NMT是活體檢測(cè)，無(wú)需提前處理。如檢測(cè)部位天然暴露在外，如斑馬魚皮膚離子細(xì)胞、側(cè)線毛細(xì)胞，直接檢測(cè)即可。如檢測(cè)部位位于體內(nèi)，需在檢測(cè)時(shí)暴露出檢測(cè)部位（可采用麻醉的方式），后檢測(cè)即可。
3、植物根莖葉等組織器官
天然暴露在外的組織器官，例如根、莖、葉的表面，無(wú)需任何處理，直接檢測(cè)即可。水培、土培、砂培、平板培養(yǎng)均可。
4、植物原生質(zhì)體/液泡
因NMT是基于微傳感器/探針的非損傷檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)不接觸樣品，故原生質(zhì)體、液泡需要從組織或者細(xì)胞中，提取出來(lái)后檢測(cè)。
5、植物葉片的表皮細(xì)胞、葉肉細(xì)胞、鹽腺細(xì)胞、保衛(wèi)細(xì)胞
無(wú)需提前處理。因這些細(xì)胞處于組織內(nèi)部，故檢測(cè)時(shí)采用撕取等方式，暴露出相應(yīng)細(xì)胞即可。
6、植物花粉管
離體萌發(fā)：在培養(yǎng)皿中萌發(fā)一段時(shí)間后即可直接檢測(cè)；在體萌發(fā)：將柱頭置于培養(yǎng)皿中，待萌發(fā)一段時(shí)間后即可直接檢測(cè)。
7、植物果實(shí)
無(wú)需提前處理。如待測(cè)部位位于果實(shí)內(nèi)部，需在檢測(cè)前暴露出相應(yīng)部位即可。
8、植物懸浮細(xì)胞
無(wú)需提前處理。檢測(cè)時(shí)，置于培養(yǎng)皿中檢測(cè)即可。
七、實(shí)驗(yàn)時(shí)有哪些檢測(cè)方式？
1、實(shí)時(shí)處理 /瞬時(shí)處理后檢測(cè)
即瞬時(shí)處理，是指在檢測(cè)過(guò)程中，在正常測(cè)試液中瞬間加入所需的干旱脅迫溶液（PEG或甘露醇等溶液）的處理方法，目的是為了觀察瞬間干旱脅迫下，樣品短時(shí)間內(nèi)的離子/分子的變化趨勢(shì)，即短時(shí)效應(yīng)。
2、預(yù)處理/提前處理好后檢測(cè)
是指在干旱脅迫一段較長(zhǎng)的時(shí)間后（數(shù)十分鐘/數(shù)小時(shí)/數(shù)天），觀察植物離子/分子進(jìn)出的情況，即長(zhǎng)時(shí)效應(yīng)。
八、檢測(cè)環(huán)境是空氣還是溶液
檢測(cè)時(shí)，只要求待測(cè)部位浸于溶液中（無(wú)需整體都浸在溶液里）。
九、樣品是如何檢測(cè)的
十、可以送樣檢測(cè)嗎
可以送樣檢測(cè)。目前非損傷微測(cè)技術(shù)測(cè)試服務(wù)由中關(guān)村NMT產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟統(tǒng)籌管理，由遍布全國(guó)的25家NMT創(chuàng)新平臺(tái)服務(wù)中心，提供檢測(cè)服務(wù)。點(diǎn)擊獲取測(cè)試服務(wù)
十一、哪里能獲取非損傷微測(cè)系統(tǒng)操作培訓(xùn)服務(wù)
請(qǐng)直接聯(lián)系旭月公司獲取設(shè)備操作培訓(xùn)服務(wù)。點(diǎn)擊此處查看培訓(xùn)服務(wù)介紹
聯(lián)系人：巨肖宇
電話：010-8262 2628按3
